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腎上腺素（EPI）ELISA 試劑盒

ELISA的試劑

在臨床檢驗(yàn)中一般采用商品試劑盒進(jìn)行測(cè)定。ELISA中有三個(gè)必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：

⑴已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；

⑵酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）；

⑶酶的底物；

⑷陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品（定性測(cè)定中），參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；

⑸酶聯(lián)物（結(jié)合物）及標(biāo)本的稀釋液；

⑹洗滌液；

⑺酶反應(yīng)終止液。

腎上腺素（EPI）ELISA 試劑盒

定量測(cè)定

ELISA操作步驟復(fù)雜，影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的*，因此在定量測(cè)定中，每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的范圍一般較寬，曲線(xiàn)高點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)值，以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線(xiàn)一般呈S形，其頭、尾部曲線(xiàn)趨于平坦，中央較呈直線(xiàn)的部分是理想的檢測(cè)區(qū)域。

測(cè)定小分子量物質(zhì)常用競(jìng)爭(zhēng)法，其標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)注意圖中橫坐標(biāo)為對(duì)數(shù)關(guān)系，這更有利于測(cè)定系統(tǒng)的表達(dá)。

操作程序

1.   分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻，37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。